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使用數據獨立的采集方法自動進行氫/氘交換質譜數據分析
發布日期:2024-03-13
來源:重水 同位素 氙氣 ,氪氣, 氖氣,氦氣, 三氯化硼,三氟化硼,氘氣, 一氧化碳, 甲烷
氫/氘交換耦合質譜 (HX-MS) 是一種基于蛋白質主鏈酰胺氫和氘化標記緩沖液之間交換的標記方法。HX-MS 用于獲取有關高階蛋白質結構和動力學的信息,因為酰胺氫交換速率受到局部結構和溶劑可及性的影響。
我們提出了與串聯質譜 (HX-MS?2?) 相結合的氫/氘交換工作流程,支持采集肽片段離子及其肽前體。該方法通過挖掘碰撞誘導解離 (CID) 生成的一組豐富的氘化片段,實現 HX 數據的真正自動管理,同時確認肽 ID 并驗證基于 MS?1的氘化計算。碎片提供的高冗余支持使用組合策略對氘計算進行置信度評估。該方法需要大多數 MS 平臺上都提供的數據獨立采集 (DIA) 方法,從而可以直接切換到 HX-MS?2。重要的是,我們發現 HX-DIA 可實現蛋白質組學級方法和廣泛的應用。通過自動管理節省了大量時間,現在可以以更高的吞吐量表征復雜的樣品。
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